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CROMATOGRAFIA EN COLUMNA |
UI. OBJETIVOS
a) Conocer la cromatografía en columna
como técnica de separación
de mezclas de
sustancias, sus carracterísticas y los factores
que en ella
intervienen.
b) Utilizar
la cromatografía en columna para la purificación de
una sustancia
contaminada con un colorante.
c) Controlar
con cromatografía en capa fina el proceso de
separación de
mezclas por cromatografía en columna.
UII. MATERIAL
(Equipo para dos alumnos).
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Columna para
cromatografía |
1 |
|
Pipeta de
5 ml * |
2 |
|
Matraz
redondo fondo plano 125 ml |
1 |
|
Probeta de
25 ml * |
2 |
|
T de
destilación |
1 |
|
Piseta de
125 ml c/eluyente |
1 |
|
Refrigerante p/agua
c/mangueras |
1 |
|
Espátula |
1 |
|
Colector |
1 |
|
Frasco p/cromatografía c/tapa |
3 |
|
Tapón esmerilado |
1 |
|
Portaobjetos |
6 |
|
Vaso de
pp. de 100 ml |
2 |
|
Tubos capilares |
4 |
|
Vaso de
pp. de 150 ml * |
2 |
|
Frascos “viales” |
8 |
|
Vidrio de
reloj |
1 |
|
Embudo de
vidrio |
1 |
|
Agitador de
vidrio |
1 |
|
Pinza
de tres dedos con nuez |
3 |
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|
Recipiente
eléctrico para B.M. |
1 |
|
*
Graduados |
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UIII. SUSTANCIAS
Acido benzoico, azul de metileno, gel de sílice para
columna, gel de sílice para
cromatografía en capa fina, acetato de etilo, hexano, sulfato de
sodio
anhídro, yodo.
UIV. INFORMACION
a) En la cromatografía en columna, las
sustancias de diferente
polaridad
tienen diferente grado de elución.
b) Existe
una relación entre el orden de elución de una sustancia
en cromatografia
en capa fina y el orden de elución de la misma
en
cromatografía en columna.
c) El
proceso de cromatografía en columna se controla por
cromatografía
en capa fina, ya que muchas sustancias son
incoloras y
sólo revelando se tiene mejor información de la
separación.
UV. PROCEDIMIENTO
Se le proporcionará 0.4 g
de una mezcla sólida, de la cual
separará
el producto
principal, por Cromatografía en Columna.
UPara
empacar la columnaU
sujétela en el soporte con las pinzas.
Engrase la llave y manténgala en posición de
cerrado. Introduzca
hasta el fondo un
pequeño pedazo de algodón ayudándose con la
varilla de vidrio, agregue U8
ml
de acetato de etiloU
y presione
suavemente el
algodón para que quede bien colocado y sin burbujas
(nota 1).
UPrepare
una suspensiónU
de 10
g de Gel de Sílice para columna en
40 ml de acetato de etilo y agite durante 5
minutos para eliminar las
burbujas.
A través del embudo vierta la suspensión en
la columna golpeando
ligeramente con los
dedos para que el empacado sea uniforme
(nota 2).
Abra la llave para eliminar el exceso de
disolvente teniendo
cuidado de no dejar
secar la Gel de Sílice (nota 3).
En el vaso de 100 ml Udisuelva
la mezcla problemaU
con la UmínimaU
cantidad de UAcetato
de EtiloU
(4 ó 5 ml) y ayudándose con el agitador
viértala con
cuidado, para que quede colocada uniformemente por encima
de la Gel de
Sílice, abra la llave para que salga eluyente y se adsorba
la muestra
aplicada, cuidando que no se seque la Gel de Sílice,
eluya la mezcla con
Acetato de Etilo.
UColecte
fracciones (eluatos)U
de 8 ml en los frascos viales y
controle la
separación, haciendo cromatografía en capa fina a cada
una de las
fracciones ante una muestra de referencia (testigo).
UEluya
las cromatoplacasU
en mezcla de UHexano-Acetato
de Etilo (1:1),U
revele con luz U.V.
En cada cromatoplaca observe el cambio de la
intensidad de
coloración de la
mancha del producto principal.
La elución y separación termina en el
momento en que no aparece
mancha.
UEn
un matraz reuna las fraccionesU
que contengan la misma sustancia
(nota 4). UPara
recuperar Ula
sustancia UdestileU
el exceso de disolvente
utilizando una
destilación simple, calentando el matraz con un
baño maría eléctrico,
deje en el matraz un residuo de 5 ml
aproximadamente y
viértalo en un vaso, para que termine de evaporarse
en la campana.
Pese el producto recuperado, calcule el
rendimiento y entréguelo
al maestro.
NOTAS.
1) La columna se puede preparar agregando
10 ml del eluyente
indicado y
después colocar en el fondo de la columna un pedazo
de algodón o
fibra de vidrio ayudándose con una varilla de
vidrio
presionando suavemente sin apretar el algodón.
Otra alternativa para colocar el algodón
o fibra de vidrio en
la columna es
con la ayuda del vacío.
2) La
columna también se puede empacar agregando primero el
disolvente a la
columna y después la gel de sílice.
3) Mantenga
siempre el nivel del eluyente 2 cm por arriba del nivel
de la gel de
sílice.
4) Reuna
las fracciones que no contienen producto principal, en el
frasco que le
indique el maestro.
UVI. ANTECEDENTES
a) La cromatografía en columna, sus
características y
aplicaciones.
Cromatografia de adsorción. Cromatografía de
partición.
b) Técnicas
de separación cromatográfica por elución, por
adición y por desplazamiento.
c) Eluyentes
y soportes para cromatografía en columna.
d) Factores
que influyen en una separación por cromatografía en
columna.
e) Consulte
los antecedentes de Cromatografía en capa fina.
UVII CUESTIONARIO.
a) ¿Porqué
el producto principal eluyó y el colorante se adsorbió
en la fase
estacionaria?.
b) Sí
se desea recuperar el colorante adsorbido, ¿qué debe
hacerse?.
c) ¿Qué
debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para
una sustancia
en una cromatografía en columna?
d) La
recuperación cuantitativa del producto
principal, sería
más completa
sí se recogieran fracciones mayores o menores
de 10 ml
¿porqué?.
e) ¿Qué tratamiento debe darse a residuos de disolvente
orgánico como
Acetato de Etilo, para desecharlos?.
f) Es
recuperable la gel de sílice para columna?.
UVIII. BIBLIOGRAFIAU
a)
Experimental Methods in Organica Chemistry
Second Edition, W.B. Saunders Co.,
b) Brewster R.Q., Vander Werf
Curso
Práctico de Química Orgánica
2PaP. Ed. Ed. Alhambra S.A.,
c) Roberts R.M., Gilbert J.C. and
Rodewald L.B.
Modern
Experimental Organic Chemistry, Third Edition,
Holt, Rinehart and
d) Abbott D. y Andrews R.S.
Introducción
a la Cromatografía
3PaP.
Ed. Alhambra S.A., Madrid, 1970.