CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

UI. OBJETIVOS

a) Conocer la técnica de cromatografía en capa fina, (c.c.f.), sus

características y los factores que en ella intervienen.

b) Calcular valores de r.f. de varias sustancias.

c) Deducir, a través del r.f., la relación que existe entre

la polaridad de las sustancias que se analizan y la de los

eluyentes utilizados.

d) Aplicar la técnica de c.c.f. como criterio de pureza de las

sustancias.

e) Aplicar la técnica de c.c.f. como criterio parcial de

identificación de sustancias.

UII. MATERIAL

Pipeta de 5 ml *	1	Espátula	1
Probeta de 25 ml *	1	Frasco p/cromatografía c/tapa	3
Tubos capilares	3	Portaobjetos	6
Agitador de vidrio	1
* graduados

U III. SUSTANCIASU

P-Hidroxiacetanilida	Acetona
m-Nitroclorobenceno	Acetato de etilo
Benzoína	Yodo
Hexano	Sulfato de sodio anhidro
Metanol	Nipagín
Etanol	Nipasol

UIV. INFORMACION

a) En cromatografía en capa fina (c.c.f.) el grado de elución de

las sustancias depende de su polaridad, así como de la

polaridad del eluyente utilizado.

b) En c.c.f., después de eluir y revelar una sustancia pura, ésta

se observa como una mancha bien definida.

c) En cambio, sustancias impuras y mezclas dejan varias manchas

o una estela en su recorrido por la placa.

d) Sustancias iguales tienen el mismo comportamiento en c.c.f. bajo

las mismas condiciones experimentales.

UV. PROCEDIMIENTO

Experimento 1.- UPolaridad de las sustancias.U

Es un experimento comparativo en el que se desea saber cuál

sustancia es más polar y cuál menos polar. Para ello se le

proporcionará a usted las soluciones 1 y 2. Prepare 3 cromatoplacas

(nota 1) y aplique estas soluciones en cada una de ellas (nota 2),

de tal manera que queden como se indica en la siguiente figura:

Eluya la primera cromatoplaca con hexano, la segunda con AcOEt y la

tercera con MeOH.

En cada caso, deje evaporar el eluyente y revele con luz

ultravioleta, observe y anote sus resultados (nota 3), luego revele

con yodo, observe nuevamente (nota 4).

Con base en los resultados obtenidos, conteste:

a) ¿Cuál es el eluyente adecuado?, ¿porqué?

b) ¿Cuál es la sustancia más polar? ¿porqué?

c) ¿Cuál es la sustancia menos polar? ¿porqué?

Experimento 2.- UPureza de las sustancias.

Se desea saber cuál sustancias es pura y cuál es impura.

Para ello se le proporcionará a usted las soluciones 3 y 4.

Prepare una cromatoplaca y aplique en ella ambas soluciones por

separado, como en el experimento anterior. Eluya entonces con

AcOEt. Revele con luz U.V. y luego con yodo. Anote sus

observaciones. Conteste:

¿Cuál es la sustancia pura? y ¿Cuál es la impura?

Experimento 3.U Influencia de la concentración.U

Se desea saber cuál es el efecto de la concentración de una

sustancia en c.c.f. Para ello se le proporcionará a usted la

solución 5.

Prepare una cromatoplaca y en ella haga 3 aplicaciones de esta

solución en orden creciente de concentración como se indica en la

siguiente figura:

Eluya entonces con AcOEt. Revele con luz U.V. y luego con yodo. En

cada caso observe la intensidad de la coloración de las manchas.

Con base en lo anterior, deduzca la relación que existe entre la

intensidad de la coloración de las manchas y la concentración de la

sustancia en cada caso.

Experimento 4.- ULa c.c.f. como criterio parcial de identificación.U

Se desea identificar los componentes de una mezcla, por medio de su

comportamiento en c.c.f. y comparándolo con el de sustancias estandar

bajo las mismas condiciones experimentales. Para esto, se le

proporcionarán a usted las soluciones 6 A y 6 B, (nota 5).

Prepare dos cromatoplacas y en ambas haga las siguientes aplicaciones:

Luego, eluya UunaU de las cromatoplacas con AcOEt revelando con luz

U.V. y después con yodo. Anote sus observaciones.

ULa otraU cromatoplaca elúyala varias veces (7 por lo menos) con un

eluyente menos polar, por ejemplo una mezcla de hexano-AcOEt (4:1),

dejando secar la placa entre una elución y otra. Observe la placa a la

luz U.V. después de cada elución. Sí después de la cuarta elución la

mezcla no se separa, siga eluyendo hasta lograr la separación.

Finalmente revele con yodo. Anote sus observaciones.

Rf = Factor de retención.

Rf = a/b

(a) = Distancia del punto de aplicación a la mancha.

(b) = Distancia del punto de aplicación al frente del eluyente

Rf ideal = 0.5

Notas

1) Para preparar las cromatoplacas se introducen dos portaobjetos

juntos, limpios y secos, en una suspensión de gel de sílice al

35% en AcOEt.

2) Para aplicar las soluciones a las cromatoplacas utilice los

capilares, los que previamente deben ser estirados en la flama del

mechero con el fin de que tenga el diámetro adecuado.

3) Con un lápiz, marque ligeramente el contorno de las manchas para

mejor ubicación de las mismas.

4) Para mayor claridad de los resultados, incluya en su informe los

dibujos de las cromatoplacas de todos los experimentos de esta

sesión. Hágalos del mismo tamaño de las placas.

5) En este caso son soluciones de nipagin y nipasol respectivamente.

6) No marque la ubicación de las manchas en la cromatoplaca hasta

después de la separación.

UVI ANTECEDENTES.

a) Concepto de cromatografía. Clasificación de la cromatografía.

Cromatografía de adsorción y cromatografía de partición.

Ejemplos.

b) Fenómeno de adsorción. La propiedad de retención. Concepto de R.f.

c) La cromatografía en capa fina, sus características y aplicaciones.

d) Eluyentes, soportes y reveladores más comunes para cromatografía

en capa fina.

e) Factores que influyen en una separación por cromatografía en capa

fina.

UVII CUESTIONARIO

a) En el experimento 1, ¿cuál de las dos sustancias, la más polar

o la menos polar, recorre mayor distancia en la placa a partir

del punto de aplicacion? ¿porqué?.

b) En ese mismo experimento, calcular los valores de r.f. y

contestar ¿Cuál de las dos sustancias tiene r.f. mayor y cuál

menor?.

c) En el experimento 3 ¿cuál es la relación que existe entre la

concentración de la mancha de una sustancia en una c.c.f.?

d) ¿Qué significa que una sustancia tenga:

rf> 0.5 ? rf = 0.5 ? rf<0.5?

e) En el experimento 4, ¿cuál de las dos formas de elución

permitió mayor separación de la mezcla?, ¿a qué se debe ésto?.

f) ¿Porqué la c.c.f. es un criterio parcial y no total de identificación?.

UVIII BIBLIOGRAFIAU

a) Moore J.A. and Dalrymple D.L.

Experimental Methods in Organic Chemistry

Second Edition, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1976.

b) Brewster R.Q., Vander Werf C.A., Mc Ewen W.E.

Curso Práctico de Química Orgánica

2P^aP. Ed., Ed, Alhambra, S.A., Madrid, 1979.

c) Robert R.M., Gilbert J.C. and Rodewald L.B.

Modern Experimental Organic Chemistry

Third Edition, Holt, Rinehart and Winston, N.Y., 1979.